Bei der Verwendung beim Kochen sind die Geschmacksunterschiede zwischen weißem und schwarzem Trüffelöl äußerst subtil. Daher können weißes und schwarzes Trüffelöl austauschbar verwendet werden. Der intensive Geschmack und das Aroma von Trüffelöl werden durch die Verwendung chemischer Verbindungen erzeugt, die denen von echten Trüffeln nachempfunden sind. Trüffelöl wird oft hergestellt, indem man ein aromatisches Gas, das als 2,4-Dithiapentan bekannt ist, mit Olivenöl oder Sonnenblumenöl kombiniert.
Es gibt einige Geschmacksunterschiede zwischen echten schwarzen und weißen Trüffeln, die aus dem Boden gegraben werden. Schwarze Trüffel haben einen erdigen Geschmack und ein scharfes Aroma, während weiße Trüffel einen moschusartigen Duft mit einem Hauch von Knoblauch und Schalotten haben. Da frische Trüffel teuer und knapp sind, wird Trüffelöl in vielen Gerichten als Ersatz verwendet. Künstliche Chemikalien wie 2,4-Dithiapentan replizieren die natürlichen Gase, die von echten Trüffeln produziert werden. Manche Leute mögen die künstliche Natur von kommerziellem Trüffelöl nicht und stellen fest, dass natürliche Trüffel bis zu 30 verschiedene Gase produzieren, eine Komplexität von Aromen, die synthetisch schwer zu kopieren ist.
Trüffelöl wird normalerweise vor dem Servieren auf das Essen aufgetragen. Ein paar Tropfen reichen aus, um den Geschmack der Gerichte zu verbessern. Während einige Trüffelöle getrocknete Trüffelstücke enthalten, tragen diese normalerweise nicht zum Geschmack des Öls bei.