Die Irokesen glaubten an mehrere Gottheiten, von denen die wichtigste der Schöpfer von Menschen, Pflanzen, Tieren und dem Guten in der Welt ist, bekannt als Großer Geist. Obwohl sie nicht glaubten, dass Menschen direkt mit diesen Geistern kommunizieren könnten, glaubten sie, dass dies durch das Verbrennen von Tabak möglich sei.
Die Irokesen hatten große Ehrfurcht vor ihren Träumen, interpretierten sie und suchten nach Zeichen in ihnen. Sie hatten keine Vollzeit-Priester oder Schamanen, sondern bestimmte Teilzeit-Spezialisten für die Durchführung religiöser Zeremonien.
Die Irokesen stellten "Falsche Gesichtsmasken" her, bei denen es sich um Gesichter handelte, die in stehende Bäume geschnitzt und dann ausgeschnitten, verziert und anschließend getragen wurden. Diese Masken stellten die Geister dar, die dem Schnitzer bei der zuvor durchgeführten Tabakzeremonie erschienen.
Männer des Stammes jagten und fischten, bauten Häuser, rodeten Felder zum Anpflanzen, handelten mit Außenstehenden und nahmen an Kriegen teil. Die Frauen bewirtschafteten, erzogen Kinder, bereiteten Mahlzeiten zu und stellten Körbe und andere Utensilien her.
Viele Teile der Kultur der Irokesen beinhalten matrilineare Aspekte. Obwohl verheiratete und geschiedene Menschen und Männer oft mehrere Frauen hatten, blieben die Kinder nach der Scheidung bei der Mutter. Auch die Vererbung folgte diesem Muster, wobei das Eigentum an die Frauen ging.
Die Irokesen praktizierten keine bekannten formalisierten Übergangsriten, außer denen, die eine politische Position bezogen.
