Schwarze Witwenspinnen bewohnen eine Vielzahl unterschiedlicher terrestrischer Lebensräume in den gemäßigten Regionen der Welt. Menschen begegnen Schwarzen Witwen häufig unter irgendeiner Form von Deckung, wie zum Beispiel Baumstämmen, Steinen, Schutt oder Müll. Sie sind häufig in der Nähe von menschlichen Wohnungen oder in Nebengebäuden oder Gärten anzutreffen, bewohnen jedoch selten menschliche Häuser. Nagetierhöhlen und hohle Pflanzen bieten auch Schwarzen Witwen Unterschlupf.
Schwarze Witwen sind nachtaktive Spinnen, die ihre Tage in einem kleinen Rückzugsort verbringen, der ein Bau oder ein Riss in einem Baumstamm sein kann. Schwarze Witwen säumen den Eingang zu ihren Rückzugsorten mit verhedderten Seidenfäden. Nachts patrouillieren Schwarze Witwen in ihren Netzen und warten auf Beute. Wenn ein Insekt im Netz landet und sich verfängt, eilt die Schwarze Witwe herbei, wickelt mit ihren Kammfüßen Seide um das Insekt und injiziert ein starkes Gift, um die Beute zu bändigen.
Obwohl Schwarze Witwen ein medizinisch bedeutsames Gift haben, das Menschen krank machen kann, sind Todesfälle bei ärztlicher Behandlung sehr selten. Der Biss ist normalerweise schmerzlos, aber einige Bissopfer berichten von einem kleinen Nadelstich. Die Symptome treten etwa eine Stunde nach dem Biss auf und können Schmerzen, Schwitzen, Anspannung der Bauchmuskulatur und Fieber umfassen. Die meisten Menschen leiden an grippeähnlichen Symptomen. Schwarze Witwenbisse verursachen nicht viele lokale Gewebeschäden.
