Ein positiver Molisch-Test weist auf das Vorhandensein eines Kohlenhydrats oder einer Verbindung hin, die in Gegenwart von H2SO4 zu Furfural oder Hydroxymethylfurfural dehydriert. An der Grenzfläche der beiden bildet sich ein violetter oder roter Ring Flüssigkeit im Reagenzglas zeigt das positive Ergebnis an. Andere Verbindungen als Kohlenhydrate verursachen falsch positive Ergebnisse. Ein negatives Ergebnis ist jedoch endgültig, um das Fehlen von Kohlenhydraten zu bestätigen.
Ein Molisch-Test erfordert das Mischen der Testlösung mit dem Molisch-Reagenz. Man stellt dieses Reagenz her, indem man Alpha-Naphthol in 95 Prozent Ethylalkohol auflöst. Nach dem Mischen der Testlösung und des Reagenzes gibt die Person 2 Milliliter der Testlösung in ein Teströhrchen und gießt 2 Milliliter Schwefelsäure ohne Mischen an der Seite des schrägen Teströhrchens hinab. Die Mineralsäure ist sehr schwer, daher bildet sie eine untere Schicht.
Die Farbänderung ist auf eine Kondensationsreaktion zwischen der Schwefelsäure und den beiden Phenolmolekülen zurückzuführen. Während die Anweisungen im Allgemeinen nach Alpha-Naphthol verlangen, bilden auch andere Phenole, einschließlich Thymol und Resorcin, den farbigen Ring.
Der Test funktioniert für alle Kohlenhydrate, einschließlich Monosaccharide, Disaccharide und Polysaccharide. Darüber hinaus ist der Test positiv für Nukleinsäure und Glykoprotein, die sich bei Exposition gegenüber starken Mineralsäuren in Monosaccharide umwandeln.