Die primäre Färbung wird bei der Gram-Färbung verwendet, um grampositive Bakterien nachzuweisen. Der primäre Fleck ist eine kristallviolette Farbe. Wenn ein Bakterium Gram-negativ ist, verliert es die primäre Färbung und nimmt die sekundäre Färbung von Safranin an.
Differenzen in der Dicke der Peptidoglycanschicht der Zellmembran von Bakterien ermöglichen es, grampositive von gramnegativen Bakterien zu unterscheiden. Gram-positive Bakterien haben eine dickere Peptidoglycan-Schicht und können die Primärfarbe Kristallviolett behalten.
Gram-Färbung ist ein dreistufiger Prozess, der eine Primärfärbung, eine Entfärbung zur Dehydratisierung der Peptidoglycanschicht und eine Sekundärfärbung zur Bestimmung der Bakterienart umfasst.