Uhu ernähren sich hauptsächlich von kleinen bis mittelgroßen Säugetieren, Vögeln, Reptilien und Amphibien. Kaninchen und Hasen sind statistisch die häufigste Beute der Bartkauz. Auch Nagetiere, Ratten, Eichhörnchen, Mäuse, Lemminge und Wühlmäuse werden regelmäßig gefressen.
Studien haben gezeigt, dass nachtaktive Tiere von Virginia-Uhus bevorzugt werden, da die Vögel auch in erster Linie nachtaktiv sind. Die Virginia-Uhu ist in der Lage, Kreaturen zu erbeuten, die zwei- bis dreimal schwerer sind als sie selbst. Laut About.com sind sie das einzige Tier, das sich regelmäßig von Stinktieren ernährt, wenn auch nicht ausschließlich.
Große gehörnte Eulen ernähren sich oft von erwachsenen und nistenden amerikanischen Krähen. Aus diesem Grund werden sie oft vorbeugend von Krähen angegriffen. Wanderfalken- und Fischadler-Nestlinge werden auch von großen gehörnten Eulen gefressen. Es ist üblich, dass die Virginia-Uhu Vögel vor dem Fressen rupft, was bedeutet, dass Teile ihrer Flügel und Beine abgerissen und weggeworfen werden.
Die Virginia-Uhu ergänzt ihre Nahrung mit Fischen, Krustentieren, Insekten, Tausendfüßlern, Regenwürmern und Skorpionen. Auch domestizierte Tiere wie kleine Hunde und Katzen werden von großen gehörnten Eulen angegriffen. Da die Virginia-Uhu ein natürliches Raubtier für so viele Kreaturen ist, sieht man häufig Plastiknachbildungen von ihnen in Gebieten, in denen es lästige Wildtiere gibt.
