Rotohrschildkröten zeigen unter Wasser ein ausgeklügeltes Balzverhalten, und wenn das Weibchen kein Interesse hat, wird es aggressiv. Wenn sie sich paaren will, geht sie nach unten. Die Paarung dauert nach einer 45-minütigen Balz nur etwa 10 Minuten.
Rotohren-Schieber werden normalerweise im Alter von etwa drei bis vier Jahren geschlechtsreif, wobei die Paarungsfähigkeit mehr von ihrer Größe als von ihrem Alter abhängt. Männchen sind geschlechtsreif, wenn sie etwa 10 cm lang sind, während Weibchen 6 bis 7 cm lang werden, wenn sie geschlechtsreif sind. Männchen haben längere Krallen als Weibchen, die sie während der Balz und Paarung verwenden. Wenn ein Mann eine Frau umwirbt, umkreist er sie und vibriert mit seinen Krallen um ihren Kopf. Obwohl sexuell unreife Schildkröten dieses Verhalten nachahmen können, paaren sie sich danach nicht mehr.
Das Weibchen passt ihre Ernährung an und verbringt nach der Paarung zusätzliche Zeit in der Sonne. Die Eiablage erfolgt innerhalb von Tagen oder Wochen und die Eier werden befruchtet, wenn das Weibchen sie legt. Findet die Eiablage jedoch erst in der folgenden Saison statt, bleiben die Spermien des Männchens im Weibchen lebensfähig. Kurz vor der Eiablage sucht sich das Weibchen eine geeignete Stelle und gräbt ein Loch, meist in Ufernähe eines Gewässers. Sie kann fünf bis sechs Gelege pro Jahr legen und jedes Gelege enthält zwei bis 30 Eier. Die Inkubationszeit hängt von der Temperatur ab, beträgt jedoch 59 bis 112 Tage.
