Einer der Faktoren, die die Enzymaktivität beeinflussen, ist der pH-Wert. Bei kleinen pH-Änderungen denaturiert das Enzym und die katalytische Aktivität geht verloren.
Ein weiterer Faktor ist die Temperatur. Bei enzymkatalysierten Reaktionen wird die Geschwindigkeit mit steigender Temperatur erhöht. Da es sich bei den Enzymen um Proteine handelt, werden sie denaturiert und bei höheren Temperaturen inaktiv.
Die Konzentration des Enzyms beeinflusst auch die Aktivität. Wenn die Konzentration des Enzyms erhöht wird, während die Konzentration des Substrats konstant gehalten wird, verdoppelt sich die Reaktionsgeschwindigkeit, wenn sich die Enzymkonzentration verdoppelt. Dies liegt daran, dass die molare Konzentration des verwendeten Enzyms fast immer niedriger ist als die molare Konzentration des Substrats.