Der natürliche Lebensraum von Vampirfledermäusen ist eine warme, tropische oder subtropische Umgebung. Sie können in Höhen von bis zu 2400 Metern gefunden werden und leben normalerweise in mäßig beleuchteten Gebieten.
Vampirfledermäuse leben in Kolonien von ungefähr 100 Fledermäusen, obwohl es in einer einzigen Kolonie bis zu 1.000 oder mehr geben können. Diese Kolonien leben in Höhlen, Baumhöhlen, verlassenen Gebäuden, alten Minenschächten und anderen dunklen Orten. Sie schlafen tagsüber, hängen kopfüber an der Spitze ihrer Wohnung und kommen nachts auf die Jagd. Vampirfledermäuse sind die einzigen Säugetiere, die vom warmen Blut ihrer Beutetiere, typischerweise Rindern, Pferden oder anderen Nutztieren, leben und vom Boden aus zuschlagen.