Wärme ist beim Anfärben von Sporen erforderlich, da die Anwendung von Wärme vegetative Zellen zerstört und grüner Malachit aus ihnen herausgespült wird, wodurch die Gegenfärbung in die Zellen gelangt. Dies ist in bestimmten Fällen ein erforderlicher Schritt Sporen, die gegen traditionelle Methoden der Sporenfärbung resistent sind.
Laut Austin Community College ist das Färben eine Technik, die von Wissenschaftlern verwendet wird, um die Sporen in einer Bakterienprobe zu identifizieren. Einer der wichtigsten Schritte bei der Sporenfärbung besteht darin, die Eigenschaften der zu analysierenden Spore zu antizipieren, da einige von ihnen gegenüber herkömmlichen Färbeprozessen resistent sind. Dies liegt oft an ihrer harten äußeren Proteinschicht, die als Keratin bekannt ist. Bei Endosporen dieser Art ist es notwendig, eine Heißfärbungstechnik anzuwenden, um die Sporen mit ihrer primären Färbung, Malachitgrün, anzufärben.
Die Anwendung von Hitze schwächt die Wand einer Zelle und ermöglicht es, dass sie gespült und von Farbstoffen durchdrungen wird. Die ursprüngliche Zelle, die eine Endospore bildet, wird als vegetative Zelle bezeichnet. Diese Zellen sind hitzeempfindlicher als die Endosporen selbst und können ausgespült und mit Malachitgrün gefärbt werden. Anhand der Quellung und Reaktion der Endosporen können mit diesem Färbeprozess Sporen mit zähen Schutzschichten identifiziert werden.
