Tüpfelhyänen ernähren sich normalerweise von großen Landpflanzenfressern, insbesondere Zebras, Gazellen, Büffeln und Gnus. Obwohl sie sich gelegentlich als Aasfresser verhalten, sind Tüpfelhyänen in erster Linie Jäger.
Tüpfelhyänen sind sehr anpassungsfähig und jagen fast jedes pflanzenfressende Tier, wenn keine gemeinsamen Nahrungsquellen gefunden werden können. Sie bewohnen einen großen Teil Afrikas, daher ändert sich ihre Ernährung mit dem Standort. Andere beliebte Beutetiere für Hyänen sind Elenantilopen, Topi, Impalas, Warzenschweine, Springböcke, Kudus, Hasen und einige domestizierte Tiere oder Nutztiere. Sie wurden auch bei der Jagd auf Nashörner und Nilpferde beobachtet. Diese Hyänen stehen oft in direkter Konkurrenz zu Löwen, was dazu führt, dass jede Art die Jagd der anderen stiehlt oder aufräumt. Das einzige bekannte Gebiet, in dem Tüpfelhyänen den Großteil ihrer Nahrung durch Aasfressen decken, ist in Sambia.
