Der Entfärbungsschritt ist der kritischste bei der Gram-Färbung. Das Ergebnis dieses Schrittes basiert darauf, wie leicht die Zelle den Kristallviolett-Jod-Komplex freisetzt.
Die Gram-Färbung wurde 1884 von Dr. Hans Christian Gram entdeckt und ist eine Differenzierungsfärbung, die zur Identifizierung von Bakterien verwendet wird. Die Aufteilung von Bakterienzellen in zwei Hauptgruppen (Gram-positiv und Gram-negativ) ist ein wichtiges Werkzeug bei der Klassifizierung und Differenzierung von Bakterien. Die beiden erforderlichen Färbungen sind die Primär- und die Gegenfärbung. Eine übermäßige Entfärbung führt dazu, dass der primäre Fleck verschwindet und Gram-positiv erscheint Gram-negativ. Auf der anderen Seite entfernt eine Unterentfärbung den kristallenen heftigen Jodkomplex nicht, was dazu führt, dass gramnegative Bakterien positiv erscheinen.
