Das leistungsstarke Enzym DNA-Helicase entwindet die DNA-Doppelstränge, indem es die Bindungen zwischen jeder der komplementären Basen aufbricht. Diese Basen werden durch starke Wasserstoffbrücken zusammengehalten, aber beim Aufbrechen dieser Basen erzeugt die DNA-Helikase zwei einzelsträngige DNA-Moleküle.
DNA-Helikase bindet sich an das DNA-Molekül am sogenannten Replikationsursprung, um den Prozess der DNA-Replikation zu beginnen. Die Helikase fungiert als eine Art Keil, der das doppelsträngige DNA-Molekül in eine Y-förmige Gabel, die als Replikationsgabel bekannt ist, "entpackt". Bis die Helikase das Ende des DNA-Strangs erreicht hat und die Replikationsgabel dabei weiterbewegt, gibt es zwei DNA-Einzelstränge und die Replikation ist im Gange.