Die Hauptstandorte der Mayo Clinic befinden sich in Rochester, Minnesota; Scottsdale und Phoenix, Arizona; und Jacksonville, Florida, laut seiner Website. Darüber hinaus hat Mayo Clinic Health System über 70 Krankenhäuser und Kliniken in Minnesota, Iowa, Wisconsin und Georgia.
Der dreiteilige Schwerpunkt der Mayo Clinic besteht aus Patientenversorgung, wissenschaftlicher Forschung und Bildung. Im Dezember 2014 werden jährlich über 1 Million Menschen, einschließlich derer aus den Vereinigten Staaten und über 100 anderen Ländern, in der Mayo Clinic behandelt. Über 600 Ärzte und Forscher arbeiten laut ihrer Website an Präventionsmaßnahmen und neuen Behandlungen von Krankheiten. Die Mayo Clinic ist auch eine Lehreinrichtung, die 1972 ihre eigene medizinische Fakultät eröffnete.